Товарів: 0
На суму: 0 грн
До фотометричного методу визначення пероксидази та поліфенолоксидази в листі та пагонах винограду
За допомогою цієї методики, яка використовується в нашій лабораторії протягом багатьох років, ми визначаємо не тільки активність водорозчинної частини оксидаз, яка зазвичай становить меншу частину від загальної кількості ферментів у тканині, але й активність основної частини ферментів, які адсорбуються в клітинах на хлоропластах або інших структурних елементах клітин.
Суть методу полягає у фотометричному визначенні кількості пурпурогаллина, що утворюється після короткочасної експозиції ферментного препарату в розчині пірогалолу в присутності або без нього (з Н2О2 визначають пероксидазу і поліфенолоксидазу, а без Н2О2 - тільки поліфенолоксидазу). Ферментний препарат являє собою листовий препарат, попередньо оброблений ацетоном.
Приготування препарату ацетону. Гальмівну дію різних речовин листя на активність ферментів усувають багаторазовою обробкою охолодженим ацетоном до видалення пігментів, фенольних та інших ацетонорозчинних речовин. Для цього 1,5-2 г листя від середньої проби зважують на технічних вагах, поміщають у порцелянову чашку і подрібнюють. Влийте ацетон, добре перемішайте, вийміть товкач. Через 1-2 хвилини ацетон обережно зливають через паперовий фільтр. Обробку повторюють 5-6 разів до повного знебарвлення осаду. Потім осад сушать при кімнатній температурі до повного видалення слідів ацетону. Отриманий осад служить ферментативним препаратом (вільним і зв'язаним) і зберігає активність протягом тижня при зберіганні в холодильнику.
Прогрес рішучості. Вибілений ферментний препарат розтирають у ступці до стану порошку. На крутильних вагах зважують 4 проби по 200 мг і кількісно розливають у сухі мірні колби на 50 мл. В неї піпеткою додають до 10 мл 1% розчину пірогалолу, намагаючись очистити горлечка колб. У дві колби додайте мікропіпеткою по 2 мл 0,5 % Н2О2 (для визначення кількості пероксидази та поліфенолоксидази), у дві інші - по 2 мл води (для визначення лише поліфенолоксидази). Суміш залишають на 10 хвилин при температурі 25 С, після чого реакцію зупиняють додаванням 5 мл 20% H2SO4. Одразу після завершення реакції утворений забарвлений у жовтий продукт пурпурогаллін переводять в ефір. Для цього в колбу до мітки додають охолоджений у холодильнику сірчаний ефір і різкими рухами струшують, у результаті чого весь пурпурний галлін переходить в ефір, а нижній шар знебарвлюється. Іноді в залежності від сорту нижня частина червоніє, але це не йде в ефір і не заважає подальшому ходу визначення. Розчин ефіру піддають фотометричному вимірюванню (ФЗК-Н) на довжині хвилі 470 мм (блакитний фільтр) у кюветах товщиною 10 мм. Кількість утвореного пурпурогаліну в конусі без H2O2 є сумарною активністю поліфенолоксидази та пероксидази, а різниця між обома визначеннями вказує на активність пероксидази. Перед фотометрією колбочки поміщають у холодильник, виймають у міру вимірювання та швидко фотометрують у закритих кюветах.
Розрахункова таблиця складена з використанням чистого пурпурогаліну, але при його відсутності в якості еталону можна використовувати розчин C2O7 (0,75 г в 1 л 0,5 н HCl).
Цей розчин за інтенсивністю забарвлення відповідає 0,01% розчину пурпурогаллина в ефірі.
У таблиці розрахунків, що додається, є додаткова колонка, де записується значення активності ферменту (в мг за 10 хвилин на 1 г порошку ацетону), якщо визначення проводилось у пробі 200 мг у мірних колбах на 50 мл (як зазначено в методиці).
У разі високої активності ферменту, коли концентрація ефірного розчину виходить за межі шкали, потрібно зменшити пробу (але взяти не менше 100 мг) або збільшити об’єм ефірного розчину шляхом розведення.
Таблиця активності оксидази (при хвилі 470 М^т в кюветах 10 мм)
x* При зважуванні 200 мг у колби на 500 мл, де весь отриманий пурпурогалін переносять у 33 мл сірчаного ефіру.
Ще почитати:
Міжнародні відносини о найменуванні шампанського та хереса
В чому різниця між шампанським, просеко та ігристим вином?
Отримання червоних ігристих вин пляшковим способом з винограду перспективних сортів
Ігристі вина
Токайські вина
У нашому блозі «Приватна Марка» багато цікавого контенту: новинки ринку виноробства, крафтові рецепти наших технологів, влоги на різні теми. Дистиляція, крафтові винокурні, виробництво крафтового сидру, крафтовий квас, рецептура сидру, виробництво крафтових напоїв за нашими рецептами, виробництво спирту в промислових масштабах. Це та багато іншого цікавого у блозі «Приватна Марка Україна» та мережі магазинів «Винороб».
Наприклад, ви вирішили відкрити сироварню, ковбасний цех або почати пекти крафтовий хліб — welcome! Ми завжди допоможемо: надамо рецептуру, забезпечимо всі витратні матеріали, відправимо нашого технолога, складемо технологічну карту, встановимо все обладнання, сертифікуємо виробництво, відкриємо для вас завод з нуля, виноробні, цехи, виноградники, налагодимо готовий продукт із виходом на ринок. Ми — компанія повного циклу: маємо багато представництв по всьому світу. Потрібна склотара, склобанки, медичний посуд, лабораторний посуд чи лабораторне обладнання — звертайтеся! У наших складах понад 900 тис. найменувань товарів та обладнання. Звертайтеся, не вагайтеся! Не важливо, де ви знаходитесь — у СНД, Європі, Америці чи Азії: ми маємо великий досвід. Privatna Marka йде в ногу з технологіями та інноваціями. Ми 20 років на ринку та відправили понад 1 млн посилок своїм клієнтам. Втілили багато креативних проєктів. Відкрили низку підприємств харчової промисловості, а також у непродовольчій та продовольчій групах технічних виробів. Втілили 147 комерційних проєктів у країнах СНД. Виробляємо 70 видів продукції власного виробництва в Україні, Німеччині та Китаї. У блозі ще більше цікавого та корисного.
Консультації за тел. +380 (67) 440-70-90
https://privatnamarka.com/
https://www.instagram.com/privatnamarka?igsh=MWt0NzNxbHJrbXh4ZQ==\
https://www.facebook.com/Privatnamarka
https://youtube.com/@privatnamarkacom?si=P5RH_spetEP3x_RQ\